Nghiên cứu tạo dòng và biểu hiện Enterocin E-760 tái tổ hợp trong Escherichia coli Rosetta 2
Từ khóa:
Bacteriocin, Enterocin E-760, Enterococcus sp, pET22b( ), E. coli Rosetta 2Tóm tắt
Enterocin E-760 là một trong số ít các peptide kháng khuẩn thuộc nhóm bacteriocin lớp II có hoạt tính kháng khuẩn đối với một số vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm như Listeria monocytogenes, Salmonella, Staphylococcus aureus,... thuộc cả nhóm gram dương và gram âm. Mục đích của nghiên cứu này là tạo dòng và biểu hiện enterocin E-760 trong Escherichia coli với hiệu quả kháng khuẩn tốt. Chủng E. coli Rosetta 2 mang plasmid pET22b(+)-SUMOE được nuôi cấy biểu hiện trong môi trường LBA, protein nội bào được thu nhận sau 5 giờ cảm ứng bởi IPTG 0,1 mM trong điều kiện nuôi lắc 200 vòng/phút ở nhiệt độ 37ºC. Kết quả kiểm tra trên bản điện di SDS-PAGE 12,6% cho thấy enterocin E-760 dung hợp SUMO được biểu hiện ở dạng tan có kích thước 25 kDa. Enterocin tái tổ hợp thể hiện hoạt tính kháng khuẩn 106 AU/mL đối với chủng chỉ thị L. monocytogenes ATCC® 35152™ nồng độ 105 CFU/mL. Kết quả trên là cơ sở để tối ưu quy trình lên men tạo enterocin E-760 nhằm ứng dụng trong bảo quản thực phẩm.
Tài liệu tham khảo
S. Arbulu et al., "Cloning and expression of synthetic genes encoding the broad antimicrobial spectrum bacteriocins SRCAM 602, OR-7, E-760, and L-1077, by recombinant Pichia pastoris," BioMed research international, (2015).
J. Line et al., "Isolation and purification of enterocin E-760 with broad antimicrobial activity against gram-positive and gram-negative bacteria," Antimicrobial agents and chemotherapy, Vol. 52, No. 3 (2008), pp. 1094-1100.
J. Jasniewski et al., "Optimization of the production and purification processes of carnobacteriocins Cbn BM1 and Cbn B2 from Carnobacterium maltaromaticum CP5 by heterologous expression in Escherichia coli," Journal of microbiological methods, Vol. 73, No. 1 (2008), pp. 41-48.
B. Mesa-Pereira et al., "Heterologous expression of biopreservative bacteriocins with a view to low cost production," Frontiers in microbiology, Vol. 9, (2018), pp. 1654.
J. Gutiérrez et al., "Cloning, production and functional expression of enterocin P, a sec-dependent bacteriocin produced by Enterococcus faecium P13, in Escherichia coli," International journal of food microbiology, Vol. 103, No. 3 (2005), pp. 239-250.
P. T. Linh và cộng sự, "Ghép nối và biểu hiện gen mã hóa Enterocin P của vi khuẩn Enterococcus Faecium trong nấm men Pichia pastoris X33," Tạp chí Công nghệ sinh học, số 2, (2010), pp. 221-226.
D. T. Hương và cộng sự, "Nghiên cứu tối ưu điều kiện biểu hiện Interleukin-3 người dung hợp với PelB trong E. coli," Tạp chí Sinh học, số 38, (2014), pp. 250-356.
U. K. Laemmli, "Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4," Nature, Vol. 227, No. 5259 (1970), pp. 680-685.
M. Balouiri et al., "Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review," Journal of pharmaceutical analysis, Vol. 6, No. 2 (2016), pp. 71-79.
M. P. Malakhov, et al, “SUMO fusions and SUMO-specific protease for efficient expression and purification of proteins,” Journal of Structural and Functional Genomics, Vol. 5, No. 1–2 (2004).
T. R. Butt, et al, “SUMO fusion technology for difficult-to-express proteins,” Protein Expression and Purification, Vol. 43, No. 1 (2005), pp. 1-9.
